沃特世HPLC液相色譜是一種以液體做流動相的用于物質分離和檢測的常用儀器。主要由進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統等組成。在工作時,HPLC依靠泵加壓樣品,令其通過填充有吸附劑的壓力柱,依據溶質在不用溶劑中的溶解度不同而對物質進行分離的,檢測器在定性物質的同時,可定量測定各個成分的比例。
1.始終保持儀器包括內在系統的清潔。
2.室內溫度始終保持恒定,因為室溫的變化對高效液相色譜檢測器有影響。
3.所有溶液、試劑、樣品、標準溶液、注射劑等都應事先準備好。
4.提前準備好備用電源防止停電。
沃特世HPLC液相色譜操作流程:
1.將已經過濾并脫氣的流動相注入儲液罐;
2.用流動相沖洗金屬過濾器,然后將過濾器浸入儲液罐的流動相中;
3.將儲液罐放置在一定的高度,以避免由于搬運和其他操作人員的移動而造成不必要的跌落。
4.然后按以下順序依次啟動高效液相色譜儀:泵→檢測器→高效液相色譜軟件→按預先計劃的方法設置軟件參數,如分析時間、檢測波長、流速等。
5.啟動泵,運行5分鐘,主要是為了排除系統中的氣泡,結束后關閉所有排氣閥;
6.然后按照預先計劃的速度,以固定的速率,如1mL/min左右,運行流動相,走基線,直到基線平穩,就可以在計算機軟件上進行監視;
7.基線平穩后,在軟件中設置樣品的運行參數,如流速和分析時間等。分析時間會因樣品、流速、柱長等因素變化。
8.參數設置完畢后,將固定體積的樣品溶液注入進樣閥,然后在軟件中啟動注入命令,進樣器中的樣品溶液就隨流動相進入色譜柱;
9.通過軟件監視各項讀數,當檢測器檢測到樣品所有峰值,停止運行并設置新的進樣。在下一個樣品分析前,建議留出5-10分鐘,待流動相通過色譜柱,以便清洗之前樣品的殘留物;確認基線穩定后,進行下一次注射。
10.分析結束后,先關閉檢測器,然后關閉泵,后關閉軟件。
沃特世HPLC液相色譜廣泛應用在有機化工、生物醫學、食品科學、環境監測等領域。