食品中毒素與有害成分的檢測

      隨著科學技術的發(fā)展，各種有機化合物與防治病蟲害的農藥常用在農作物上，雖然一定程度地促進了農作物的生長，保證了生產產量，但降低了農作物的安全性，有一些強性農藥或獸藥，即便經過雨水洗刷，依然不能*清除，還有部分殘留，這時若采摘者或食用者在食用時沒有仔細清洗，這些農藥或獸藥進入體內，會對人身體健康造成巨大的影響，嚴重者甚至威脅人體的生命安全，而利用液相色譜技術對其中殘留的、不易被發(fā)現的各種農藥或獸藥進行檢測，可重現其中的有害毒素成分，讓食用者充分辨別食品的質量安全。

1、農藥殘留量的測定

      目前蔬菜水果中不同種類農藥的殘留測定方法主要是氣相色譜法（GC）或氣相色譜-質譜法（GC-MS），但 GC 對沸點高或熱穩(wěn)定性差的農藥需進行衍生化處理，這樣就不可避免地增加了樣品預處理的難度，也使它的應用受到一定程度的限制。

      李永新等建立了同時測定蔬菜水果中12種農藥殘留的反相液相色譜分析方法。將樣品搗碎，用乙酸乙酯超聲提取，經Florisil固相萃取柱凈化、正己烷-二氯甲烷（1∶1）洗脫、氮氣吹干、甲醇溶解并定容后，采用液相色譜柱分離、紫外檢測，以外標法定量。結果表明，5種有機磷農藥、6種ni除蟲菊酯類農藥和除草劑二甲戊樂靈的檢測限為0.114～2.65ng。應用該法對從市場上隨機購買的蓮白、小白菜、黃瓜等20個蔬菜樣品和蘋果、梨等20個水果樣品進行檢測，其中yang化le果的檢出率分別為55%和45%，xin硫磷的檢出率分別為50%和30%，由此可見，明文規(guī)定的不得用于蔬菜、瓜果的劇毒、高毒農藥仍有檢出。

      何紅梅等建立了液相色譜法分離、紫外檢測器檢測同時測定蔬菜中除蟲脲、氟鈴脲、氟苯脲等7種苯甲酰脲類殘留量的方法，色譜柱為 SunFireTM C₁₈［250mm×4.6mm（i.d.），5μm］，柱溫為室溫，檢測波長為260nm，同時分離的農藥種類多，但需梯度洗脫，對儀器的要求較高。丁慧瑛等建立了同時測定蔬菜中除蟲脲等11種苯甲酰脲農藥殘留的液相色譜-串聯質譜分析方法，C₁₈柱分離，甲醇-0.005mol/L 乙酸銨溶液為流動相梯度洗脫，電噴霧負離子模式離子化，三重四極桿質譜測定，方法回收率為69%～109%，所需儀器并不普及。苯甲酰脲類農藥中除蟲脲和氟鈴脲的測定居多，胡敏等采用反相液相色譜法，C₁₈ 色譜柱，甲醇-水（75∶25）為流動相，254nm 波長下用 DAD 檢測器，測定了除蟲脲的含量。

      李海飛等運用HPLC柱后衍生熒光檢測法，測定了蘋果、梨、桃、葡萄、香蕉和芒果等水果樣品中ti滅威亞砜、ti滅威砜、滅多威、三羥基ke百威、ti滅威、ke百威和甲萘威7種氨基甲酸酯類農藥的殘留量，結果7種農藥3種不同濃度的平均添加回收率在72.5%～116.2%，低檢出限為0.0037～0.0074mg/kg。

2、獸藥殘留量的測定

      獸藥殘留是指對食品動物用藥后，動物產品的任何食用部分中的原型藥物或/和其代謝產物，包括與獸藥有關的雜質的殘留。殘留較大的獸藥主要包括抗生素類、合成抗生素類、抗寄生蟲類、生長促進劑和殺蟲劑等。

      研究人員建立了一種養(yǎng)殖海水中諾氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星3種喹諾酮類抗生素殘留量的液相色譜-熒光測定方法：水樣經稀鹽酸調 pH 后經 HLB 固相萃取柱富集、凈化，用外標法定量；結果表明，該方法的靈敏度高，重現性好，適用于養(yǎng)殖海水中諾氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星的檢測。

      王帆等研究了檢測大豆異黃酮類保健食品中三種雌激素（雌二醇、雌酮、己烯雌酚）含量的分析法。采用 Hypersil ODS2 C₁₈色譜柱，流動相為甲醇-水（體積比53∶47），流速1.0mL/min，檢測波長280nm，該方法的線性范圍在0.5～250mg/L，三種雌激素的低檢出限分別為0.8mg/L、0.9mg/L、0.4mg/L。

      陳輝華等建立了同時檢測水產品中四環(huán)素類和氟喹諾酮類獸藥多殘留的HPLC法。樣品經固相萃取小柱凈化，以甲醇-丙二酸-氯化鎂水溶液梯度洗脫，紫外檢測器檢測。對樣品預處理和色譜分析條件進行了優(yōu)化，8種抗生素（土霉素、四環(huán)素、金霉素、沙拉沙星、恩諾沙星、達氟沙星、環(huán)丙沙星、單諾沙星）在0.1～10.0mg/L 范圍內與峰面積線性關系良好，低檢出限（S/N=3）為0.011～0.051mg/kg，定量下限（S/N=10）為0.035～0.170mg/kg，平均加標回收率為81.0%～96.0%。

3、霉菌毒素的檢測

      每年霉變糧食的量占據了總糧食產量的很大一部分，這不僅對經濟造成了損失，若霉變的糧食被人畜食用，還會引發(fā)中毒、癌癥等癥狀。霉菌毒素主要有huang曲霉毒素、玉米赤霉烯酮等，尤其是huang曲霉毒素，被列為誘發(fā)癌癥的高危因素。而某些初步霉變的糧食，其感官上的變化并不明顯，因此，對霉菌毒素的檢測尤為重要。HPLC 可依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物，直接分析樣品中各種細菌的代謝產物，確定其病原微生物的特異性化學組分，從而確定被檢測食品中是否存在微生物超標以及是否威脅到人類健康等。

      程樹峰等建立了一種快速檢測糧食中huang曲霉毒素 B₁、B₂、G₁、G₂ 的碘柱前衍生-液相色譜法：樣品經提取液處理后，加入適量碘衍生劑衍生，衍生后進行色譜分析，結果4種huang曲霉毒素在7min內測定完成，低檢出限均在皮克水平。

      牟仁祥等建立了同時檢測糧谷中T-2和 HT-2毒素的免疫親和柱凈化-液相色譜質譜法：免疫親和柱凈化后，采用液相色譜-質譜（LC-MS）測定，結果T-2和 HT-2毒素在0.005～0.500mg/L 范圍內與峰面積線性關系良好，在加標條件下，T-2和 HT-2毒素的平均回收率為76%～90%，低檢出限（S/N=3）分別為0.130mg/kg、0.002mg/kg。

      Pérez-Torrado 等對來自不同的21種玉米粉中的玉米赤霉烯酮霉素進行了分析，樣品經高壓液體提取后，采用LCESI/MS 檢測，其中包括正離子電噴霧ESI（+）和ESI（-）2種質譜檢測方法，結果ESI（+）和ESI（-）的低檢測限分別為5μg/kg、1μg/kg，僅有一種樣品中玉米赤霉烯酮霉素的含量低于歐盟委員會的標準量。

      楊小麗等采用液相色譜-串聯質譜法測定了地龍中huang曲霉毒素 B₁、B₂、G₁ 和 G₂ 的含量，結果表明4種huang曲霉毒素的檢出限分別為0.03μg/kg、0.02μg/kg、0.03μg/kg 和0.02μg/kg。栗建明等建立了中藥材中4種huang曲霉毒素測定的快速液相色譜-串聯質譜方法，表明huang曲霉毒素 B₁ 在0.1021～10.21ng/mL內、huang曲霉毒素 B₂ 在0.0612～7.65ng/mL 內、huang曲霉毒素 G₁ 在0.193～9.65ng/mL 內、huang曲霉毒素 G₂ 在0.121～7.55ng/mL 內，線性關系均良好，r>0.9998；4種huang曲霉毒素的回收率均在77.0%～102.4%之間。

4、N-亞硝胺、多環(huán)芳烴和雜環(huán)芳烴的測定

      腌臘肉品中常添加硝酸鹽或亞硝酸鹽作發(fā)色劑用，由于添加量過大或自身的還原作用在肉品中生成 N-亞硝胺。N-亞硝胺可誘發(fā)肝癌、結腸癌等。某些 N-亞硝胺化合物，如 N-亞硝基二jia胺、N-亞硝基二乙胺、N-亞硝基四氫吡咯等也是一類致癌物質。過去采用氣相色譜法測定食物中的揮發(fā)性亞硝胺，其中僅色譜測定一步便需耗時1h之多，而采用液相色譜法則只需要13min。

      肉品煙熏、油炸、燒烤時常產生多環(huán)芳烴并污染肉品。多環(huán)芳烴（簡稱 PAH）中主要的致癌物質有3，4-苯并（a）芘、二苯并（a，h）蒽，而芘和螢蒽對苯并（a）芘的致癌有促進作用。分離蒽、苯并（e）芘、芘、苯并（b）螢蒽及苯并（a）芘五個成分，用氧化鋁色譜柱需耗10h，用 TLC 為10min，用GC則苯并（a）芘的保留時間通常為數十分鐘。應用液相色譜法，以 ermaphase ODS 色譜柱，在 4min 內即可*分離。分離 PNH 常用的色譜柱填充劑為十二烷基化學鍵合的薄殼型硅膠（如permaphase ODS、Vy-dac RP、SiI-X-H RP 等），這類填充劑大的優(yōu)點是可以應用梯度淋洗，這樣大大有利于縮短分離時間和提高分離效果。

      此外，雜環(huán)芳烴中的主要致癌物為二苯（a，h）氮蒽，在城市空氣的塵埃中、煤焦油及煙草中均含有此成分。各種雜環(huán)烴可在 Zipax 擔體上涂漬0.5% AgNO₃ 作固定相，以乙腈-正己烷（1∶99）作淋洗液進行分離。其分離機制可能是銀離子與雜環(huán)烴中的氮原子形成絡合物。也可用 Corasil 涂漬0.3%BOP 作固定相，二異丙醚作淋洗液進行分離。

      002年4月，瑞典斯德哥爾摩大學 Margareta Tornqvist 教授在油炸及焙烤的馬鈴薯和谷物類食品中發(fā)現了具有神經毒性的潛在致癌物——丙烯酰胺（acrylamide），該毒物很容易經消化道、皮膚、肌肉或其他途徑吸收，并能通過胎盤屏障，是一種*的神經毒素和準致癌物，已被 WHO 癌癥研究中心（IRAC）列為可能致癌物質（ⅡA類）。

      2005年4月13日，我國衛(wèi)生部發(fā)布了“建議全國消費者避免食用油炸薯片和油炸薯條”的公告，呼吁采取措施減少食品中丙烯酰胺可能導致的對健康的危害。柳其芳等研究了檢測食品中致癌物丙烯酰胺的固相萃取-二極管陣列檢測-反相液相色譜測定方法，用水提取食品中的丙烯酰胺，采用C₁₈固相萃取小柱對樣品液進行純化，流動相為甲醇-水（5∶95），DAD 掃描波長范圍190～370nm，檢測波長 210nm。結果表明，丙烯酰胺在0.1～10mg/L 濃度范圍內線性良好，方法檢出限為10ng/g。用建立的方法分析了59份面包、谷類、豆類、堅果類和土豆類食品，結果顯示，食品炸焦的程度越深，則丙烯酰胺的含量越高。

5、HPLC 在其他食品分析檢測中的應用

       HPLC 可用于食用藥材指紋圖譜的檢測。劉洪宇等建立了不同加工方法制成的玄參飲片的 HPLC 指紋圖譜測定方法，研究不同種類玄參飲片對指紋圖譜的影響。郜玉鋼等采用反相液相色譜對農田人參與伐林人參中9種人參皂苷單體的含量進行比較分析，從而建立了同時測定農田人參中9種人參皂苷單體含量的方法。HPLC 還可用于食品中其他營養(yǎng)成分的分析檢測。何康昊等建立了蛋黃中角黃素及蝦青素的反相液相色譜-二極管陣列檢測法（RHPLC-DAD）。李艷等采用液相色譜法測定了豆類及豆制品中大豆異黃酮的含量。

文章來源：EWG1990儀器學習網